檢驗中再遇到，可別說不會診斷！

新型隱球菌性腦膜炎/腦炎是由新型隱球菌侵入所引起的感染性疾病， 是中樞神經系統真菌感染中最常見的一種。 新型隱球菌有三個變種， 即新生變種、格特變種和上海變種。 人體的肺、皮膚等部位感染新型隱球菌後， 可以向中樞神經系統播散， 但多數新型隱球菌性腦膜炎/腦炎患者並不伴有外周的新型隱球菌感染。 新型隱球菌是機會致病菌， 在免疫功能低下（如長時間使用廣譜抗菌素、糖皮質激素、免疫抑制劑等藥物和愛滋病等）患者， 新型隱球菌性腦膜炎/腦炎的發病率顯著升高。 起病隱襲、病程進展快、臨床表現和影像學均無特異性是新型隱球菌性腦膜炎/腦炎的特點，

因此， 腦脊液的病原學檢查就顯得尤為重要。

目前， 新型隱球菌的實驗室檢查方法很多， 但主要的有以下幾種。

1、新型隱球菌培養為診斷的金標準， 並可鑒定新型隱球菌的類型， 但培養所需時間較長。

2.墨汁染色（負染色法）其是根據背景著色而菌體本身不著色的原理來襯染莢膜， 方法簡單快速， 為診斷的金標準， 但檢出率會隨著莢膜的破裂而下降。 此外， 新型隱球菌數量較少和檢驗人員的識別經驗不足（如將隱球菌判斷為氣泡和白細胞， 或將氣泡和白細胞等誤認為隱球菌）， 也會影響墨汁染色的結果， 造成假陰性或假陽性。

3.腦脊液細胞學檢查方法快速簡便，

為診斷的金標準， 不僅可以通過細胞分類來評估患者的免疫狀態和治療效果， 而且未治療患者的腦脊液經細胞玻片離心沉澱儀製片和瑞氏-吉姆薩（MGG）染色後， 極易查見新型隱球菌。 光鏡下， MGG染色的新型隱球菌菌體深藍、圓形（直徑5~15μm）、常成簇排列、無核、莢膜可呈輻射狀， 部分菌體可見出芽。

經MGG染色的新型隱球菌著色不受莢膜破裂的影響， 且形態特殊， 易於辨認， 不易漏診。 而將腦脊液中的有形物採用離心沉澱法收集， 也極大地提高了新型隱球菌的陽性檢出率。 樊新紅等發現， 腦脊液細胞學檢查首次腰穿新型隱球菌檢出率為95.8％， 顯著高於墨汁染色的68.8%。

4.阿利新蘭染色方法簡便快速， 為診斷的金標準。 但因同為襯染莢膜的染色，

莢膜破裂會造成陽性檢出率的下降。

5. 新型隱球菌菌體計數（血球計數板）法 快速簡便， 為診斷的金標準。 但有時菌體難與白細胞區分， 辨認較困難。

6. 新型隱球菌莢膜多糖體抗原檢測 快速簡便， 敏感性和特異性高， 但不能作為診斷的金標準。 目前多採用乳膠凝集試驗和膠體金法。

7. PCR技術 相對於上述幾種檢測方法， PCR技術成本昂貴， 操作複雜， 並無優勢可言。

8. 基因組學方法 敏感性高， 特異性強。 腦脊液培養、墨汁染色、MGG染色、阿利新蘭染色和新型隱球菌菌體計數雖為診斷的金標準， 但當病原體數量極少時， 皆可呈陰性， 且除腦脊液培養外， 其餘方法均不能鑒別新型隱球菌的類型。 新型隱球菌類型的鑒定對於臨床治療具有指導意義。

使用二代測序技術（Next Generation Sequencing， NGS)檢測腦脊液中的新型隱球菌， 不僅可以檢測出極微量的病原體， 提高檢出率， 而且還可以進行相關分型， 對於新型隱球菌腦膜炎/腦炎早期診斷和治療都具有十分重要的臨床意義。

參考文獻

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