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血常規檢驗誤差你掌握了嗎?幾個實例,非常實用!

例1.EDTA依賴性血小板聚集(看片要點):患某, 呼吸內科, 男, 發熱待查, 今日查血常規, PLT 9×109/L, 查看儀器見提示血小板聚集, 再查昨日血常規, PLT 8.5×109/L, 歷次醫囑顯示昨日已輸血小板, 並骨穿行細胞學檢查。 聯繫臨床發現患者並無出血傾向, 疑似EDTA依賴性血小板聚集所致的假性血小板減低, 遂告知臨床更換枸櫞酸鈉(PT管)複查, 得PLT 185×109/L。 看片要點是重點關注片尾, 可見血片的縫隙之間血小板聚集。

例2.冷凝集(嚴重水浴難以糾正的處理辦法, 如何判斷已經糾正):患某, 科別?, 診斷?, RBC 1.76×1012/L, HGB 109.8g/L, HCT 0.159, MCV 125fl, 水浴後重測, RBC 3.621×1012/L, HGB 112.5g/L, HCT 0.34, MCV 105fl。 但遇到嚴重者水浴半小時以上亦無效, 如何處理?

例3.寒冷病(區別於冷凝集):患某, 男, 27歲, 血液內科, 白血病?患者初診在急診科, 抽血後立即送檢並馬上上機發結果, 當時WBC 1.46×109/L, PLT 330.6×109/L, 次日入院後重抽複查, WBC 335.20×109/L, PLT 1107×109/L, 推片發現白細胞及血小板均少見, 應為減低。 考慮到初診是急診送檢, 標本溫度尚可, 因此將標本經水浴30min後立即上機, 結果WBC 1.79×109/L, PLT 10.2×109/L。 此結果較為可靠。 如何解釋此病例?

例4.HCT與HGB不一致(如何向臨床解釋):患某, 男, 血液內科, 慢性髓細胞性白血病, 血常規WBC 423.5×109/L, RBC 1.9×1012/L, HGB 49g/L, HCT 0.31, MCV 159fl。 臨床來電, 疑問HGB與HCT為何不一致, 血色素那麼低, 而壓積僅稍低?解釋這個問題, 要理解這幾個指標中哪些是實測, 哪些是換算。

寫在前面:請抱著懷疑的精神, 用批判性的眼光看待以下內容, 鑒於水準有限, 個中說法如有不妥請自行查閱相關文獻、論著, 同時亦歡迎與本人展開交流。

文中述及的主要是誤差分析, 即假性增高或減低, 實際工作中, 應注重聯繫病人的臨床特點, 加強與臨床醫生的溝通, 力爭發一份準確的報告。

我們先從一張血常規化驗單的各項指標說起, 談談各項指標之間的影響因素。 WBC、RBC、PLT的計數是基於庫爾特原理進行的, 細胞通過計數池時因存在電阻而產生電壓, 電壓高低表現為脈衝大小, 反映了細胞大小, 其脈衝數則反映細胞數。

(1)在WBC通道發生了什麼?

在進行血細胞測定前, 全血標本必須用稀釋液在儀器的外部或內部進行一定比例的稀釋, 一般用1:251的稀釋倍數來測量白細胞。 在白細胞通道, 為了使紅細胞全部破裂, 再加入一定量的溶血劑(lyse)使紅細胞膜破裂,

釋放出血紅蛋白, 僅留下紅細胞膜微小的殘餘部分。 體積>35fl顆粒產生的脈衝歸為白細胞計數。 此時該通道中存在有白細胞、血小板, 因血小板體積比白細胞小得多, 故而可以區分。 因此, 紅細胞、血小板在某些情況下能影響WBC。

①如嚴重貧血的病人, 骨髓造血系統活躍, 一些未成熟的紅細胞釋放到外周血中, 即有核紅, 溶血劑破壞後仍存在核, 因而使WBC偏高, 嚴格來說應予以修正。 若鏡檢100個WBC, 見10個有核紅, 則WBC修正值應為(100/110)×WBC計數值。

②又如紅細胞對溶血劑抵抗, 見於肝功能受損者(肝硬化、肝癌等)、異常血紅蛋白病(地貧等)。

③血小板聚集, 大型血小板。 我們知道, 紅細胞碎片能影響PLT, 使之假性增高, 那反過來血小板聚集, 巨血小板是否亦影響RBC呢?其實,

主要是影響WBC, 後面會闡述原因。

④寒冷蛋白的沉澱, 即例3出現的WBC假性增高的原因, 亦在後面闡述。

⑤前面都是使WBC增高的影響因素, 同時亦存在假性減低的因素, 如白細胞聚集, 可發生於寒冷凝集, 抗凝劑相關聚集。 較少見, 我們在工作中尚未遇到, 或因水準有限而忽視。

(2)在RBC通道, 又發生了什麼?

在此通道, 未能對白細胞、血小板進行特殊處理, 因而同時存在兩者, 為何存在仍可計數RBC呢?首先說白細胞, 觀察其與紅細胞的單位可發現相差1000倍, 因係數的差異, 所以實際上WBC:RBC大致為750:1, 因此WBC的影響因素在RBC小數點後兩三位元數, 因而正常情況下自然是可以忽略不計。 其次是血小板, 前已述及, 通過庫爾特的電阻抗原理, 根據脈衝大小將紅細胞與血小板區分開,

因而能得到PLT計數結果。 下面談到影響因素,

①一些白血病出現WBC極高, 如例4達到40多萬, 此時WBC對RBC已有影響, 正是這個原因出現了例4的血常規特點, 後有詳述。

②當發生血小板聚集時, 為何前面說此時的血小板主要是影響WBC, 而非RBC。 原因與正常情況下WBC對RBC的干擾可以忽略不計是一樣的。 PLT的單位與RBC的數量級亦相差1000倍, 雖然正常PLT的係數達到100~300, 但發生聚集時PLT的數值下降即為明顯, 如例1, 可低至個位數, 因此, 正如在計數RBC時可以忽略WBC的干擾一樣, 聚集的血小板對RBC的影響亦可以忽略。 反而時在WBC通道, 聚集的血小板體積夠大時對WBC造成影響, 使之升高。

③RBC假性減低的影響因素, 一般有冷凝集, 如例2, 抗凝劑所致的紅細胞聚集, 自身免疫性疾病所致的紅細胞聚集, 均未遇到過哦。

(3)PLT亦在RBC通道,前面說到PLT對RBC的影響,現在PLT受影響因素干擾所產生的誤差情況。

①假性增高,紅細胞碎片(溶貧、DIC等),小紅細胞,寒冷蛋白沉澱(如例3)。

②假性減低。需要強調的是,應格外重視PLT減低的情況,尤其是初診病人。如例1所述,PLT減低可誤導臨床輸注血小板(輸血風險),骨穿(病人受罪),若發生意外,其後果無法估量。衛生部印發《臨床輸血技術規範》有述及,PLT<50×109/L已經應該考慮輸血小板。“因此根據經驗,門診患者PLT低於50×10∧9/L,無出血情況,則可信度不高。”(出自“EDTA依賴性血小板聚集”《檢驗與臨床的溝通——案例分析200例》P145)所以遇到初診PLT減低,建議低於100,應考慮塗片複檢。PLT減低,可見於抽血不順發生肉眼不可見的凝集,甚至有一些缺乏基本認識的護士抽血發現凝塊後直接挑出凝塊送檢,這種無知令人憤慨;其次便是例1所提到的EDTA依賴性血小板聚集,此種情況的原理似乎仍有待探討,其在門診病人中發生的概率約為千分之一,以我院的門診量來看,應高度重視這種情況。若是這種情況,可以參考以下幾點信息,一是長條圖,可見WBC長條圖最左側約50fl處有抬高,此即為聚集的PLT計數為WBC;二是報警信息,可報巨血小板(GiantPlatelets)、血小板凝塊(PlateletClumps);三是聯繫臨床,瞭解患者應無皮膚紫癜、黏膜出血等出血傾向;四是必須推片複檢,且應該重點關注片尾紅細胞的縫隙,可發現大量的血小板聚集。此時應聯繫臨床,告知我們的懷疑,更換PT管得到驗證後,囑醫生告知患者今後血常規應用PT管,這樣才算做到位。

綜上,說完這三個大頭,順便帶過,在推片鏡檢時,常需判斷血小板、白細胞數與檢測值是否大致相當,在《外周血細胞形態學檢查技術》(王霄霞,人民衛生出版社)一書記載如下:

關於通過血片推斷血小板數量,在分佈均勻,無異常聚集或纖維蛋白絲時,塗片可大致估算血小板數量,方法為,血小板數(×109/L)=一個油鏡視野中血小板平均個數×15×109/L。

WBC的估算方法,同樣是分佈均勻,白細胞計數(×109/L)=一個高倍鏡視野中白細胞平均個數×2×109/L。

另有文獻及專著記載方法:

血塗片中血小板數(×109/L)=計數100個白細胞時血小板的數量/100個白細胞×白細胞(×109/L)。

注:白細胞數量為血液分析儀的計數結果。

相差顯微鏡法:取20μL全血加10g/L草酸銨稀釋液0.38mL溶血10min後,充入牛鮑計數板濕盒中放置30min,高倍鏡計數中央大方格四周4個中方格和中央1個中方格;血小板特別少時,計數中央整1大格。

——血塗片血小板計數法對血液分析儀的覆核作用[J]. 臨床檢驗雜誌,2004,2(6):442、462

(4)說到HGB。

因其檢測原理是比色法,通過吸光度變化而來,因此,黃疸、脂血、高球蛋白、高白細胞、高血小板均可能影響HGB結果,但其影響是否有統計學差異,不得而知。若是黃疸、脂血,可採用離心置換血漿(生理鹽水或稀釋液)後測定。

(5)說到WBC分類了。

①三分群。學生時代經常被問到這個問題,關於白細胞分類長條圖,從左到右依次為小細胞群(主要為淋巴),中間細胞群(主要為單核),大細胞群(主要為中性),看過血片的都知道,單核的體積實際上比中性大,為何長條圖大細胞群是中性而不是單核?因計數WBC時,為溶解紅細胞加入了溶血劑,此溶血劑可使白細胞漿經細胞膜滲出,胞膜緊裹在細胞核或存在顆粒物質周圍,因此,因顆粒在支撐,含有顆粒的中性比無顆粒的單核或淋巴體積大些,但實際體積並非如此。白細胞長條圖並不能代表其自然狀況,但可用於判斷白細胞體積群分佈情況。說到這裡,平時偶爾能發現,LH750時有單核分類特別高的情況,鏡檢發現實際單核不高,中性高;有時重新複查,分類又可正常。如何解釋這種情況?可能是因為一些中性含有的顆粒很少,被溶解時沒有顆粒的支撐,這部分中性被誤認為是單核了。個人觀點,請勿輕信。

②五分類,僅知道是VCS計數,V是低頻波,分析細胞體積;C是高頻波,分析細胞核型;S鐳射,分析細胞的顆粒特性。關於長條圖和散點圖,本人認識膚淺,有待今後在工作中繼續學習。

(6)其次到HCT、MCV、MCH、MCHC了。

這幾個指標要放在一起說,因為它們之間關係密切,可以通過公式聯繫在一起,因此雖看似複雜,其實亦有道道可循。從定義上來說,HCT是紅細胞沉降下來的體積占所有血液體積的比例;MCV是每個紅細胞的體積;MCH是每個紅細胞含有的血紅蛋白量;MCHC是每個紅細胞含有的血紅蛋白濃度。因此MCV=HCT/RBC,MCH=HGB/RBC(記這條公式可以參照MCH的單位是pg,HGB的單位和RBC的單位,哪個是分子哪個是分母應該不難理解);MCHC=HGB/HCT(單位是g/L其實就是濃度,所以分母必須有個體積吧,其實HCT是比積沒有單位,意會即可)。需要說明的是,儀器中,HCT不是實測,而是通過HCT=MCV×RBC而來,而MCV是實測,庫爾特原理;MCH,MCHC都是換算指標,不是實測,但其對於判斷誤差有重要的提示作用。理解這幾個指標的來由,對於判斷RBC,HGB,HCT結果是否準確十分重要。闡明例4需要結合這幾個指標以及前面所說的影響因素方能得到解釋。

(7)提一下RDW吧。

RDW要結合RBC,HGB和MCV來說才有意思。我們都聽說過,除外缺鐵貧,MCV低者可提示地貧基因攜帶者。鑒別地貧和地貧基因攜帶者,有人認為,RBC正常,HGB減低,MCV減低,RDW增高,考慮缺鐵貧;RBC正常,HGB減低或正常,MCV減低,RDW不增高,考慮地貧基因攜帶者。又有人認為,加入RDW一起判斷,可能把大量靜止性的,輕型的地貧攜帶者漏掉了,因此主張,典型的地貧攜帶者血常規為小紅細胞,紅細胞增多,不貧血,有如下規律:女RBC>5.0,MCV<80;男RBC>5.5,MCV<80即可考慮地貧攜帶者。沒有閱讀過相關文獻,如感興趣,推薦閱讀張俊武,龍桂芳《血紅蛋白與血紅蛋白病》,曾益濤《人類血紅蛋白》,南方醫科大學徐湘民地中海貧血系列論文,廣州婦幼保健院李東至、廖燦地中海貧血系列論文。地貧最終診斷還是依靠血紅蛋白電泳和基因分析。

均未遇到過哦。

(3)PLT亦在RBC通道,前面說到PLT對RBC的影響,現在PLT受影響因素干擾所產生的誤差情況。

①假性增高,紅細胞碎片(溶貧、DIC等),小紅細胞,寒冷蛋白沉澱(如例3)。

②假性減低。需要強調的是,應格外重視PLT減低的情況,尤其是初診病人。如例1所述,PLT減低可誤導臨床輸注血小板(輸血風險),骨穿(病人受罪),若發生意外,其後果無法估量。衛生部印發《臨床輸血技術規範》有述及,PLT<50×109/L已經應該考慮輸血小板。“因此根據經驗,門診患者PLT低於50×10∧9/L,無出血情況,則可信度不高。”(出自“EDTA依賴性血小板聚集”《檢驗與臨床的溝通——案例分析200例》P145)所以遇到初診PLT減低,建議低於100,應考慮塗片複檢。PLT減低,可見於抽血不順發生肉眼不可見的凝集,甚至有一些缺乏基本認識的護士抽血發現凝塊後直接挑出凝塊送檢,這種無知令人憤慨;其次便是例1所提到的EDTA依賴性血小板聚集,此種情況的原理似乎仍有待探討,其在門診病人中發生的概率約為千分之一,以我院的門診量來看,應高度重視這種情況。若是這種情況,可以參考以下幾點信息,一是長條圖,可見WBC長條圖最左側約50fl處有抬高,此即為聚集的PLT計數為WBC;二是報警信息,可報巨血小板(GiantPlatelets)、血小板凝塊(PlateletClumps);三是聯繫臨床,瞭解患者應無皮膚紫癜、黏膜出血等出血傾向;四是必須推片複檢,且應該重點關注片尾紅細胞的縫隙,可發現大量的血小板聚集。此時應聯繫臨床,告知我們的懷疑,更換PT管得到驗證後,囑醫生告知患者今後血常規應用PT管,這樣才算做到位。

綜上,說完這三個大頭,順便帶過,在推片鏡檢時,常需判斷血小板、白細胞數與檢測值是否大致相當,在《外周血細胞形態學檢查技術》(王霄霞,人民衛生出版社)一書記載如下:

關於通過血片推斷血小板數量,在分佈均勻,無異常聚集或纖維蛋白絲時,塗片可大致估算血小板數量,方法為,血小板數(×109/L)=一個油鏡視野中血小板平均個數×15×109/L。

WBC的估算方法,同樣是分佈均勻,白細胞計數(×109/L)=一個高倍鏡視野中白細胞平均個數×2×109/L。

另有文獻及專著記載方法:

血塗片中血小板數(×109/L)=計數100個白細胞時血小板的數量/100個白細胞×白細胞(×109/L)。

注:白細胞數量為血液分析儀的計數結果。

相差顯微鏡法:取20μL全血加10g/L草酸銨稀釋液0.38mL溶血10min後,充入牛鮑計數板濕盒中放置30min,高倍鏡計數中央大方格四周4個中方格和中央1個中方格;血小板特別少時,計數中央整1大格。

——血塗片血小板計數法對血液分析儀的覆核作用[J]. 臨床檢驗雜誌,2004,2(6):442、462

(4)說到HGB。

因其檢測原理是比色法,通過吸光度變化而來,因此,黃疸、脂血、高球蛋白、高白細胞、高血小板均可能影響HGB結果,但其影響是否有統計學差異,不得而知。若是黃疸、脂血,可採用離心置換血漿(生理鹽水或稀釋液)後測定。

(5)說到WBC分類了。

①三分群。學生時代經常被問到這個問題,關於白細胞分類長條圖,從左到右依次為小細胞群(主要為淋巴),中間細胞群(主要為單核),大細胞群(主要為中性),看過血片的都知道,單核的體積實際上比中性大,為何長條圖大細胞群是中性而不是單核?因計數WBC時,為溶解紅細胞加入了溶血劑,此溶血劑可使白細胞漿經細胞膜滲出,胞膜緊裹在細胞核或存在顆粒物質周圍,因此,因顆粒在支撐,含有顆粒的中性比無顆粒的單核或淋巴體積大些,但實際體積並非如此。白細胞長條圖並不能代表其自然狀況,但可用於判斷白細胞體積群分佈情況。說到這裡,平時偶爾能發現,LH750時有單核分類特別高的情況,鏡檢發現實際單核不高,中性高;有時重新複查,分類又可正常。如何解釋這種情況?可能是因為一些中性含有的顆粒很少,被溶解時沒有顆粒的支撐,這部分中性被誤認為是單核了。個人觀點,請勿輕信。

②五分類,僅知道是VCS計數,V是低頻波,分析細胞體積;C是高頻波,分析細胞核型;S鐳射,分析細胞的顆粒特性。關於長條圖和散點圖,本人認識膚淺,有待今後在工作中繼續學習。

(6)其次到HCT、MCV、MCH、MCHC了。

這幾個指標要放在一起說,因為它們之間關係密切,可以通過公式聯繫在一起,因此雖看似複雜,其實亦有道道可循。從定義上來說,HCT是紅細胞沉降下來的體積占所有血液體積的比例;MCV是每個紅細胞的體積;MCH是每個紅細胞含有的血紅蛋白量;MCHC是每個紅細胞含有的血紅蛋白濃度。因此MCV=HCT/RBC,MCH=HGB/RBC(記這條公式可以參照MCH的單位是pg,HGB的單位和RBC的單位,哪個是分子哪個是分母應該不難理解);MCHC=HGB/HCT(單位是g/L其實就是濃度,所以分母必須有個體積吧,其實HCT是比積沒有單位,意會即可)。需要說明的是,儀器中,HCT不是實測,而是通過HCT=MCV×RBC而來,而MCV是實測,庫爾特原理;MCH,MCHC都是換算指標,不是實測,但其對於判斷誤差有重要的提示作用。理解這幾個指標的來由,對於判斷RBC,HGB,HCT結果是否準確十分重要。闡明例4需要結合這幾個指標以及前面所說的影響因素方能得到解釋。

(7)提一下RDW吧。

RDW要結合RBC,HGB和MCV來說才有意思。我們都聽說過,除外缺鐵貧,MCV低者可提示地貧基因攜帶者。鑒別地貧和地貧基因攜帶者,有人認為,RBC正常,HGB減低,MCV減低,RDW增高,考慮缺鐵貧;RBC正常,HGB減低或正常,MCV減低,RDW不增高,考慮地貧基因攜帶者。又有人認為,加入RDW一起判斷,可能把大量靜止性的,輕型的地貧攜帶者漏掉了,因此主張,典型的地貧攜帶者血常規為小紅細胞,紅細胞增多,不貧血,有如下規律:女RBC>5.0,MCV<80;男RBC>5.5,MCV<80即可考慮地貧攜帶者。沒有閱讀過相關文獻,如感興趣,推薦閱讀張俊武,龍桂芳《血紅蛋白與血紅蛋白病》,曾益濤《人類血紅蛋白》,南方醫科大學徐湘民地中海貧血系列論文,廣州婦幼保健院李東至、廖燦地中海貧血系列論文。地貧最終診斷還是依靠血紅蛋白電泳和基因分析。

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