重症肌無力的診斷要點包括：活動後加重、休息後減輕（晨輕暮重）的骨骼肌無力。疲勞試驗及藥理學實驗陽性。電生理檢查：低頻重複電刺激波幅衰減；單纖維肌電圖抖顫明顯增寬。血清乙醯膽鹼受體抗體滴度增高。神經肌肉接頭處活檢，可見突觸後膜皺褶減少、變平坦和其上乙醯膽鹼受體數目減少。
鑒別診斷包括：Lambert一Eaton肌無力綜合征。週期性麻痹。脊髓灰質炎。多發性肌炎。肌營養不良症。代謝性肌病。眼外肌麻痹的疾病：後交通動脈瘤、Tolosa一Hunt綜合征、糖尿病眼外肌麻痹、眼咽肌營養不良症、CPEO、Kearns一Sayre綜合征等。