2005年,
周秀娜以模特的身份參加動漫節,
獲得亞軍。
2006年,
出演喜劇片《打雀英雄傳》;6月,
出演喜劇片《新紮師妹3》;同年,
出演情景喜劇《老馮日記》。
2008年,
出演警匪動作片《花花型警》;11月,
出演由葉念琛執導的愛情喜劇片《絕代雙嬌》。
2012年1月, 與蕭敬騰、曾志偉、趙正平等合作主演愛情動作喜劇電影《殺手歐陽盆栽》, 在片中飾演有著冷靜頭腦與理智的電腦高手娜娜;2月, 與範逸臣、鄧家佳等合作主演驚悚電影《夜店詭談》, 在片中飾演一對性感妖嬈的姊妹花艾米與艾麗;7月, 主演由林小鑫執導愛情電影《獵音師》,
2013年1月, 與林家棟、曾國琿等合作主演愛情電影《紙月亮》;1月21日, 與方力申、李曼等連袂主演的古裝懸疑劇《唐朝浪漫英雄》播出, 在劇中飾演波斯商人的女兒陶夭夭,這也是周秀娜首次出演內地電視劇,2月,與藍正龍、謝君豪合作主演驚悚電影《電梯驚魂》,在片中飾演與院長兒子林飛相戀的醫院護士白潔;2月10日,出演由周星馳執導的古裝神話電影《西遊·降魔篇》上映,在片中飾演教段小姐跳舞色誘玄奘的四煞;
2月12日,與甄子丹、柯震東等合作出演的愛情電影《在一起》上映;2月24日,與鄭嘉穎、韓雪等合作主演的年代劇《葉問》播出,在劇中飾演大雜院包租婆的女兒珍妮;2月25日,與AEG新亞洲娛樂簽約;8月,與方力申、張馨予等合作主演愛情冒險電影《致命閃玩》,在片中飾演阿德的前女友Mina;9月,與杜汶澤、鄒凱光等合作主演喜劇電影《爛滾夫鬥爛滾妻》;
9月22日,一直關注慈善事業的周秀娜,在電影《我想結婚的時候你在哪》的開機新聞發佈會上,獲頒“最美心靈藝術家獎”;10月,與李燦森、孫祖楊等合作主演驚悚電影《冷瞳》,在片中飾演內斂、端莊的富豪千金蘇雨辰;12月,與袁詠儀、邱心志等合作主演愛情片《有招沒招之愛情達人》;12月10日,主演由向灼執導的推理網劇《Xgirl》播出,在劇中飾演“人體測謊機”孫小美;12月13日,與汪東城、陳漢典等合作主演的時尚喜劇電影《我的美麗王國》上映,在片中飾演天資聰穎、內心純真的模特周若童。
2014年8月,主演由車徑行執導的現代都市情感電影《我想結婚的時候你在哪》,在片中飾演婚紗設計師蘇菲;同月,與鄭伊健、王菀之合作主演愛情電影《不再說分手》,在片中飾演阿森的“永遠對小姐”小嵐,3月,主演由錢升瑋執導的東方愛情魔幻電影《非狐外傳》,在片中飾演容貌出眾,身份成謎的仙兒。
2015年2月,與古天樂、張翰等合作出演偵探喜劇電影《神探駕到》,9月,與鄭中基、雨僑合作出演喜劇電影《猛龍特囧》;
12月,與陳喬恩、孫藝洲等合作主演愛情電影《北京時間》,在片中飾演每天周旋在各種浮華誘惑之中的王小莫女友。
2016年1月,與吳鎮宇、江疏影等合作出演喜劇片《惡人報喜》;1月6日,與辰亦儒、沈建宏等合作主演現代都市靈異類網路劇《美女公寓》播出,在劇中飾演流淌著妖怪血液的長腿辣妹沈亞桐;
2月,與盧頌之、童冰玉等合作主演動作片《霹靂囧花》,在片中飾演性格強勢,事業心重的女拳手阿寶,7月,與鄭伊健、文凱玲等合作主演愛情網路電影《我的極品女神》,在片中飾演擁有玫瑰一樣豔麗外貌的機器人iGirl001,她則憑藉該片獲得首屆亞洲新媒體電影節最佳女演員獎。
2017年,與鄧麗欣、樂基兒合作主演愛情電影《女士復仇》,在片中飾演生活溫馨甜蜜的女飛賊Dior;5月,與金燕玲、鄭欣宜等合演主演愛情電影《29+1》,在片中飾演保持身材,嚴格自律的自危派林若君。
2月12日,與甄子丹、柯震東等合作出演的愛情電影《在一起》上映;2月24日,與鄭嘉穎、韓雪等合作主演的年代劇《葉問》播出,在劇中飾演大雜院包租婆的女兒珍妮;2月25日,與AEG新亞洲娛樂簽約;8月,與方力申、張馨予等合作主演愛情冒險電影《致命閃玩》,在片中飾演阿德的前女友Mina;9月,與杜汶澤、鄒凱光等合作主演喜劇電影《爛滾夫鬥爛滾妻》;
9月22日,一直關注慈善事業的周秀娜,在電影《我想結婚的時候你在哪》的開機新聞發佈會上,獲頒“最美心靈藝術家獎”;10月,與李燦森、孫祖楊等合作主演驚悚電影《冷瞳》,在片中飾演內斂、端莊的富豪千金蘇雨辰;12月,與袁詠儀、邱心志等合作主演愛情片《有招沒招之愛情達人》;12月10日,主演由向灼執導的推理網劇《Xgirl》播出,在劇中飾演“人體測謊機”孫小美;12月13日,與汪東城、陳漢典等合作主演的時尚喜劇電影《我的美麗王國》上映,在片中飾演天資聰穎、內心純真的模特周若童。
2014年8月,主演由車徑行執導的現代都市情感電影《我想結婚的時候你在哪》,在片中飾演婚紗設計師蘇菲;同月,與鄭伊健、王菀之合作主演愛情電影《不再說分手》,在片中飾演阿森的“永遠對小姐”小嵐,3月,主演由錢升瑋執導的東方愛情魔幻電影《非狐外傳》,在片中飾演容貌出眾,身份成謎的仙兒。
2015年2月,與古天樂、張翰等合作出演偵探喜劇電影《神探駕到》,9月,與鄭中基、雨僑合作出演喜劇電影《猛龍特囧》;
12月,與陳喬恩、孫藝洲等合作主演愛情電影《北京時間》,在片中飾演每天周旋在各種浮華誘惑之中的王小莫女友。
2016年1月,與吳鎮宇、江疏影等合作出演喜劇片《惡人報喜》;1月6日,與辰亦儒、沈建宏等合作主演現代都市靈異類網路劇《美女公寓》播出,在劇中飾演流淌著妖怪血液的長腿辣妹沈亞桐;
2月,與盧頌之、童冰玉等合作主演動作片《霹靂囧花》,在片中飾演性格強勢,事業心重的女拳手阿寶,7月,與鄭伊健、文凱玲等合作主演愛情網路電影《我的極品女神》,在片中飾演擁有玫瑰一樣豔麗外貌的機器人iGirl001,她則憑藉該片獲得首屆亞洲新媒體電影節最佳女演員獎。
2017年,與鄧麗欣、樂基兒合作主演愛情電影《女士復仇》,在片中飾演生活溫馨甜蜜的女飛賊Dior;5月,與金燕玲、鄭欣宜等合演主演愛情電影《29+1》,在片中飾演保持身材,嚴格自律的自危派林若君。