佛羅倫斯行政首長召喚在米蘭的達·芬奇和在羅馬的米開朗琪羅，
委託製作作為該市的自由象徵的領主廣場(Piazza dellaSignoria)舊行政宮(Consiglio in Palazzo Vecchio)內的壁畫《戰鬥場景》。
此時達·芬奇正著手創作喬康多夫人畫作《蒙娜麗莎》，
而米開朗琪羅在完成〈大衛》作品之後，
正著手為多尼之聖家族繪製和雕刻一系列聖母像。
這兩位藝術家的生命光輝短暫地交會於此，
並引起某種程度的論辯；隨後兩位大師1506年相繼離開佛羅倫斯，
分別前往米蘭和羅馬。
拉斐爾於佛羅倫斯工作期間，
仍然不時地和家鄉保持聯繫。
在這個階段中完成的系列肖像畫作品如〈貢查加·伊莉莎貝塔夫人〉，
構圖以人為主體，
背景為遠山水，
色調濃郁，
是典型黑、金色系的作品，
現藏于佛羅倫斯烏菲齊美術館。